Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento e Padronização de um Ensaio Imunoenzimático para Diagnosticar a COVID-19

Introdução

O coronavírus causador da Síndrome Respiratória Aguda Grave 2 (SARS-CoV-2) é um novo vírus, que surgiu em Wuhan, província de Hubei na China, no início de dezembro 2019, capaz de causar crises respiratórias leves, moderadas e graves em humanos e, devido a sua alta capacidade de transmissão, rapidamente se tornou uma doença pandêmica, a Coronavirus disease 2019 (COVID-19).

Objetivo (s)

Desenvolver um teste diagnóstico imunoenzimático de baixo custo e alto desempenho para a detecção da COVID-19.

Material e Métodos

Por meio de abordagens de bioinformática, e expressão heteróloga foram triados antígenos provenientes de proteínas estruturais do SARS-CoV-2 para compor o teste sorológico de ELISA. Os antígenos foram validados utilizando-se um painel de amostras de voluntários negativos N: 21 (RT-PCR negativos) e positivos N: 42 (amostras obtidas a partir do 15º dia após o diagnóstico positivo por RT-PCR) no qual, foi avaliada a presença de anticorpos específicos IgA, IgM e IgG anti-SARS-CoV-2. Da mesma forma, foram realizados testes comparativos frente aos kits diagnósticos já comercializados (N: 17 RT-PCR negativos e N: 40 RT-PCR positivos) e a análise da reatividade de anticorpos após a vacinação com os imunizantes CoronaVac (N: 21 voluntários) e AstraZeneca (N: 22 voluntário).

Resultados e Conclusão

Os antígenos foram avaliados através das análises de especificidade, sensibilidade e curva ROC. Ensaio de validação da sequência antigênica por expressão heteróloga em E. coli. Fração insolúvel: IgA (ROC: 0,971; SEN: 95,2; ESP: 95,2), IgM (ROC: 0,795; SEN: 53,0; ESP: 100,0), IgG (ROC: 0,994; SEN: 97,0; ESP: 100,0). Fração solúvel: IgA (ROC: 0,995; SEN: 94,9; ESP: 100,0), IgM (ROC: 0,719; SEN: 61,5; ESP: 87,5), IgG (ROC: 0,995; SEN: 97,4; ESP: 100,0). De forma semelhante, o antígeno recombinante demonstrou resultados da reatividade de anticorpos IgA, IgM e IgG anti-Sars-Cov-2, por ELISA, equivalente aos testes sorológicos comerciais (EUROIMMUN, BIOLISA, Allserum, ErbaLisa e Labtest). Além de potencial candidato para compor um teste imunoenzimático capaz de apontar a soroconversão considerando anticorpos da classe IgG específicos anti-SARS-CoV-2, após 21 dias da terceira aplicação do imunizante CoronaVac. Além disso, foi desenvolvido uma prova de conceito para um teste imunocromatográfico rápido utilizando o antígeno proteico.

Palavras-chave

SARS-CoV-2, coronavírus, proteína recombinante, ELISA, teste diagnóstico.

Agradecimentos

CAPES / CNPq / FAPEMIG / CODEMG