Dados do Trabalho

Título

Construção e análise de diferentes vacinas de DNA contendo o gene que codifica a proteína S do SARS-CoV-2

Introdução

O Coronavírus da Síndrome Respiratória Aguda Grave 2 (SARS-CoV-2) é o agente etiológico da COVID-19. Desde 2019 mais de 760 milhões de casos da doença foram confirmados, com aproximadamente 7 milhões de óbitos. A proteína estrutural spike (S) é considerada um dos principais antígenos para o desenvolvimento de vacinas contra o SARS-CoV-2. Além de ser o principal componente da superfície viral, essa proteína é responsável por mediar a interação do vírus com a célula alvo, sendo amplamente reconhecida pelo sistema imunológico do hospedeiro e levando à produção de anticorpos neutralizantes. Desde o início da pandemia do SARS-CoV-2 novas variantes foram descritas, incluindo variantes classificadas como de preocupação, responsáveis por novas ondas de infecção. Algumas vacinas vêm sendo administradas na população, no entanto, existem incertezas quanto à eficácia protetora das atuais vacinas para possíveis novas variantes. Dessa forma, estudos de novas vacinas são imprescindíveis.

Objetivo (s)

Construção e avaliação de vacinas de DNA contendo o gene da proteína Spike do SARS-CoV-2.

Material e Métodos

Inicialmente, foram realizadas diversas análises por bioinformática, a fim de identificar a sequência mais representativa/predominante desta proteína em meados de 2021. A partir da sequência selecionada, foram desenhadas diferentes construções com algumas modificações do gene original. Os genes foram sintetizados e clonados em um plasmídeo de expressão em células eucarióticas, gerando as vacinas de DNA: pCOV-SDelta, pCOV-S3Delta, pCOV-S3KDelta, pCOV-S4Delta e pCOVS-5delta. As análises dos plasmídeos recombinantes por digestão com enzimas de restrição e sequenciamento confirmaram a presença dos fragmentos e os quadros de leitura abertos de todas as sequências. Para avaliar a expressão das proteínas recombinantes, células BHK-21 e HEK293-T foram transfectadas com as diferentes construções, utilizando lipofectamina, e a produção da proteína foi avaliada por imunofluorescência utilizando anticorpos específicos.

Resultados e Conclusão

Todas as construções foram capazes de mediar a expressão das diferentes formas da proteína S de SARS-CoV-2, embora algumas em maior magnitude. Futuramente, essas proteínas recombinantes serão avaliadas quanto a capacidade de induzir respostas imunes em modelo animal e de conferir proteção.

Palavras-chave

SARS-CoV2, vacinas de DNA, proteína spike

Agradecimentos

Lab. de Biotecnologia e Fisiologia de Infecções Virais; Lab. de Biologia Computacional e Sistemas; PG em Biologia Celular e Molecular
CAPES, FAPERJ, CNPq, INCTV, IOC-FIOCRUZ