Dados do Trabalho

Título

Culex quinquefasciatus resistente à toxina Binária de Lysinibacillus sphaericus apresenta uma alta repressão de uma panteteinase

Introdução

A resistência de Cx. quinquefasciatus à toxina Binária, ingrediente ativo de larvicidas a base de Lysinibacillus sphaericus, está associada a status de repressão do gene cqm1 que codifica o receptor desta toxina. Um estudo prévio do transcriptoma de larvas de uma linhagem Bin-resistente mostrou uma elevada repressão do cqm1, como esperado, mas também uma alta repressão de uma panteteinase, cuja função é desconhecida.

Objetivo (s)

O objetivo foi investigar o perfil de transcrição desta panteteinase em duas linhagens de Cx. quinquefasciatus resistentes e uma suscetível à toxina Bin e identificar esta proteína em um sistema de expressão recombinante

Material e Métodos

O status dos genes panteteinase e cqm1 foi comparado no transcriptoma (RNA-seq) das larvas das colônias, o gene da panteteinase foi analisado in silico, clonado e expresso em células Sf9 e, finalmente, sua transcrição e expressão foram investigadas em larvas.

Resultados e Conclusão

O transcriptoma mostrou que a panteteinase estava altamente reprimida nas larvas resistentes, de forma similar ou maior do que o gene cqm1. A panteteinase foi expressa em células Sf9 como uma proteína de 70 kDa. A sequência mostrou três sítios de N-glicosilação preditos, mas, apenas uma discreta presença de N-glicosídeos (1 kDa) foi detectada in vitro. A sequência da proteína não tem predição de âncora GPI mas, in vitro, a proteína foi detectada por imunodetecção com um anticorpo anti-panteteinase em amostras de microvilli intestinal, indicando sua potencial localização como proteína de membrana, tal como o receptor Cqm1. A quantificação relativa média de transcrição da panteteinase foi menor nas larvas resistentes (0,19 ± 011) em relação às suscetíveis, cuja transcrição foi maior e mostrou uma ampla variação (2,3 ± 2). O perfil de transcrição relativo contrastante da panteteinase em larvas suscetíveis e resistentes a toxina Bin abre perspectivas para investigar seu potencial papel no modo de ação de toxinas de inseticidas bacterianos e em aspectos da fisiologia de mosquitos.

Palavras-chave

Transcriptoma, cqm1, receptor, vaninas

Agradecimentos

CAPES, CNPq