Dados do Trabalho

Título

BIOENSAIO IN VITRO DE INIBIÇÃO DE FORMAÇÃO DE OOCINETOS DE PLASMODIUM VIVAX: UMA ESTRATÉGIA PARA BUSCA DE COMPOSTOS BLOQUEADORES DE TRANSMISSÃO DA MALÁRIA

Objetivo (s)

O objetivo deste estudo foi padronizar o ensaio de inibição de oocinetos a partir de amostras de sangue de pacientes infectados por Plasmodium vivax.

Material e Métodos

O estudo foi realizado em colaboração com o Centro de Pesquisa em Medicina Tropical – CEPEM, localizado na região de Porto Velho Rondônia. Após a coleta das amostras infectadas com formas sexuadas de P. vivax, foi iniciado o processo de quantificação da gametocitemia por meio da coloração por Giemsa. Foram selecionadas 10 amostras com a parasitemia igual ou superior a 10 gametócitos em 200 leucócitos, após essa confirmação, foi iniciado o processo de lavagem das hemácias infectadas com meio RPMI-1640 incompleto por centrifugação para a retirada dos leucócitos. Finalizado os processos de lavagens, foi iniciado o processo de separação dos gametócitos utilizando o gradiente de purificação Histodenz na concentração de 55% diluído em PBS 1x (pH final 7,2) na proporção de 1:3 feito a partir de uma solução estoque [27.6% (w/v) Histodenz, 5,0 mM tris-HCl, 3,0 mM KCl, e 0,3 mM EDTA]. Em seguida, a amostra foi centrifugada uma vez a 1500 xg por 20 minutos sem freio. Finalizado esse processo, o pellet foi coletado da interface e esse foi lavado por duas vezes a 500 xg por 5 minutos. Feito isso, o hematócrito foi ajustado para 2% com o meio de oocinetos suplementado com 20% de soro humano. Os gametócitos purificados foram adicionados nos poços das placas na proporção de 1:10 de meio de oocinetos. Após esse processo, a placa foi incubada por 24 horas na temperatura de 21-24 ºC. A quantificação dos oocinetos foi determinada por meio da microscopia mediante a contagem de 100 campos.

Resultados e Conclusão

Os resultados demonstraram que a contagem média de oocinetos diferenciados foi de 1.762,58 ± 1.209,71. A partir dos resultados expressos, esse bioensaio pode nortear pesquisas para eleger novos compostos para o bloqueio da transmissão da malária a partir de cepas circulantes de P. vivax in vitro.

Palavras-chave

Bioprospecção, Oocinetos, Gametócitos, P. vivax.

Agradecimentos

Fundação Oswaldo Cruz Rondônia - Fiocruz, EpiAmO, Coordenação de Aperfeiçoamento Pessoal de Nível Superior – CAPES, Programa Fiocruz de Fomento à Inovação – N°01/2022.