Dados do Trabalho

Título

Avaliação in vitro da imunopatogênese da paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTLV-1 em modelo de barreira hematoencefálica

Introdução

A Paraparesia Espástica Tropical/Mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM/TSP) é uma doença crônica causada pelo HTLV-1, que desencadeia uma resposta inflamatória no sistema nervoso central (SNC) em cerca de 1 a 5% dos indivíduos infectados. Após dez anos de instalação da HAM/TSP, aproximadamente 30% dos indivíduos encontram-se paraplégicos, confinados ao leito. A resposta imunológica do hospedeiro é determinante para a patogênese da HAM/TSP, pois as células do sistema imune podem ultrapassar a barreira hematoencefálica e causar danos ao SNC. Entretanto, é importante salientar que ainda não está totalmente elucidado quais são os componentes celulares que atuam na imunopatogênese da HAM/TSP.

Objetivo (s)

Identificar mecanismos celulares de barreira hematoencefálica in vitro envolvidos na imunopatogênese da HAM/TSP associadas ao HTLV-1.

Material e Métodos

Foram incluídos indivíduos infectados pelo HTLV-1 assintomáticos e sintomáticos de HAM/TSP, atendidos no Hospital Universitário Oswaldo Cruz (CEP: 50563115.9.0000.5190). Realizou-se um co-cultivo celular indireto entre linhagem endotelial (HBMEC) e neuronal (SH-SY5Y). As HBMECs foram adicionadas no inserto de membrana semipermeável e as SH-SY5Y no poço da placa de 24 poços. Estímulos foram feitos com PBMCs de indivíduos HTLV-1 positivos (com ou sem manifestação neurológica da doença, n=8) ou linfócitos de linhagem MT-2 (controle positivo) nas HBMECs. As células e sobrenadantes foram coletadas em 24, 48 e 72 horas, para análise de perfil de citocinas inflamatórias (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 e TNF), por meio de quantificação através de Cytometric Bead Array. Determinou-se o percentual de apoptose/necrose das células SH-SY5Y e HBMEC por meio do kit de detecção de apoptose Anexina V/Iodeto de Propídio. Utilizou do teste t-student para análises comparativas entre dois grupos ou ANOVA para mais grupos, assumindo p<0,05.

Resultados e Conclusão

IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF tiveram produção aumentada no co-cultivo quando expostos à PBMCs de indivíduos com HAM/TSP do que sem HAM/TSP e seus controles. SH-SY5Y mostrou aumento significativo em morte celular após 72h de cultivo. Pode-se sugerir que a barreira estabelecida pela HBMEC foi parcialmente, ou totalmente destruída e induziu uma resposta inflamatória também nas células neuronais. Aqui, invidíduos com a forma grave da infecção pelo HTLV-1 apresentam perfil mais inflamatório do que os que não tem a forma grave.

Palavras-chave

Barreira hematoencefálica; Imunopatogênese; HTLV-1.

Agradecimentos

Fiocruz; Hospital Universitário Oswaldo Cruz.