Dados do Trabalho

Título

Avaliação da técnica Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) para diagnóstico da leishmaniose visceral canina e PCR convencional, com amostras de swab conjuntival

Introdução

A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença zoonótica, negligenciada e de difícil diagnóstico, causada por protozoários do gênero Leishmania. A técnica de LAMP é um teste diagnóstico molecular, de baixa complexidade e tempo de execução quando comparado à PCR convencional (cPCR) e apresenta resultados promissores na literatura. Além disso, a coleta por swab conjuntival é pouco invasiva, e mais confortável ao animal.

Objetivo (s)

Avaliar os resultados de LAMP e de cPCR, frente às técnicas parasitológicas, com amostras de swab conjuntival extraídos por kit comercial e por método direct-boil.

Material e Métodos

Este trabalho recebeu dispensa de CEUA visto que utiliza amostras biológicas oriundas de projetos anteriores já aprovados (LW19/20; 071/2015). Foram realizados exames parasitológicos direto e cultura como referência, com amostras de linfonodo poplíteo, medula óssea e/ou baço. Foram analisados 52 cães com sorologia reativa para LVC (TR DPP e ELISA). Foram coletadas amostras de swab conjuntival em duplicata (swabs 1 e 2) do olho esquerdo e direito. O kit comercial utilizado para extração de DNA dos swabs-1 foi kit PureLink™ Genomic DNA, e para swabs-2 foi utilizado método direct-boil/fervura. As amostras foram submetidas à cPCR kDNA (RV1/RV2) e LAMP k26 com mix WarmStart Colorimetric LAMP. Para ambas técnicas moleculares foi utilizado volume final de 25µl, sendo 5µl de DNA. Os controles para as reações foram realizados com cepa de referência de L. infantum e cão sabidamente negativo e saudável. A sensibilidade analítica do LAMP k26 foi analisada através de diluição seriada de L.infantum. até 1fg. Os resultados dos ensaios foram inseridos no banco de dados RedCap.

Resultados e Conclusão

Dos 52 cães avaliados, 37 foram positivos em pelo menos um dos testes parasitológicos, e 15 foram negativos em ambos. A sensibilidade analítica de LAMP foi de 100fg. Em swabs-1, positividade de cPCR e LAMP foram de 75% (39/52) e 54% (28/52), respectivamente. Em swabs-2, positividade de cPCR e LAMP foram de 92% (48/52) e 98% (51/52), respectivamente. Para swabs-2, em comparação com os testes parasitológicos, ambas técnicas moleculares tiveram melhor positividade do que para swabs-1. Ademais, a extração por fervura associada à amplificação por LAMP pode apresentar um diagnóstico mais acessível e rápido, podendo ser utilizados em laboratórios descentralizados, valendo-se de mais investimentos para aprimoramentos de cada técnica, assim como para o uso associado de ambas.

Palavras-chave

Leishmaniose visceral; PCR convencional;LAMP; direct-boil