Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇÃO DE MicroRNAs REGULADORES DA VIA TLR/NFKB EM MACRÓFAGOS INFECTADOS COM ISOLADOS DE Leishmania braziliensis DERIVADOS DAS FORMAS CLÍNICAS DE LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA

Introdução

A leishmaniose é considerada uma das principais doenças tropicais negligenciadas. Ainda não há vacinas aprovadas para imunizar populações endêmicas e as opções terapêuticas de uso corrente são ainda limitadas, o que justifica a necessidade de buscar meios para compreender e lidar com suas manifestações clínicas. Uma abordagem que tem sido explorada em leishmaniose nos últimos anos é a participação dos microRNAs (miRNAs) na regulação de vias chave da resposta imune. Os miRNAs representam uma classe de pequenos RNAs não codificantes que participam na complexa e plástica interação entre o hospedeiro e os patógenos.

Objetivo (s)

Caracterizar o perfil de expressão de miRNAs de macrófagos derivados de monócitos (MDMs) infectados com isolados das formas clínicas clássicas de LTA: leishmaniose cutânea (LC), leishmaniose mucosa (LM) e leishmaniose disseminada (LD), correlacionando-os com a carga parasitária, marcadores imunológicos e genes de morte celular.

Material e Métodos

Os MDMs foram obtidos de doadores saudáveis e infectados com isolados das diferentes formas clínicas de L. braziliensis da área endêmica de Corte de Pedra, BA. O RNA total foi extraído após 4h, 12h e 24h de infecção. A quantificação de miRNAs e mRNA foi realizada por RT-qPCR utilizando os métodos SYBR Green e TaqMan®, respectivamente. Dosagens de marcadores imunológicos foram realizados no sobrenadante das culturas por ELISA sanduíche, e a carga parasitária definida por microscopia.

Resultados e Conclusão

A partir de 12hs observamos um aumento diferencial na expressão dos miRNAs 103a-3p, -21-3p e 125a-3p nos macrófagos infectados com isolado de LM e dos miRNAs -155-5p, -146a-5p, -132-5p e -147a na infecção com ambos, isolados de LM e LD. Em relação a carga parasitária, nossos dados mostram uma correlação positiva entre os miRNAs -103a-3p, -21-3p, -155-5p, -146a-5p e a infecção com as cepas LM e LD, acrescidos dos -132-5p e -9-3p que foram exclusivos na forma LM. Também obtivemos correlação entre a expressão de alguns miRNAs com os marcadores TNF, CXCL-9 e CXCL-10. Em relação aos genes de morte celular, correlações dos miRNAs com os genes CFLAR e BLC2 ocorreram na LM, assim como dos genes TNFRSF10A, CFLAR e GZMB na LD. A expressão dos miRNAs se correlaciona fortemente com carga parasitária, resposta inflamatória e isso possivelmente reflete modulagem dos eventos de morte celular, sugerindo a participação dessas moléculas na patogênese das diferentes formas clínicas da L. braziliensis.

Palavras-chave

Leishmaniose, Macrófagos, miRNAs, Carga parasitária.

Agradecimentos

INCT-DT, FAPESB