Dados do Trabalho

Título

DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO AUTOMATIZADO PARA ISOLAMENTO DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE TRYPANOSOMA CRUZI EM AÇAÍ (Euterpe oleracea) COMO FERRAMENTA DE CONTROLE DE QUALIDADE PARA INDÚSTRIA ALIMENTÍCIA

Introdução

A tripanossomíase causada pelo protozoário parasita Trypanosoma cruzi, mais conhecida como doença de Chagas, é uma doença predominante da América Latina que afeta aproximadamente de 6 a 8 milhões de pessoas e causa, em média, 14 mil óbitos por ano (Santos et al., 2020). Entre 2011 e 2020, foram notificados 2.668 casos de doença aguda de Chagas, sendo que 78,5% dos casos foram ocasionados pela transmissão oral (Ministério da Saúde, 2022). Grande parte dos casos coincide com a época de colheita do açaí, de agosto a novembro, sugerindo uma relação direta entre a incidência da doença e o consumo da fruta. Em Belém, estima-se que aproximadamente 200.000 litros/dia são consumidos durante esse período (Santos et al., 2018).

Objetivo (s)

Desenvolver um kit nacional de extração automatizada de DNA de T. cruzi em açaí contaminado artificialmente, utilizando a tecnologia das beads magnéticas, com objetivo de obter um material genético com alta pureza para a posterior detecção do parasita por qPCR, e, assim, podendo ser empregado como ferramenta de controle de qualidade da indústria alimentícia.

Material e Métodos

O conjunto de reagentes foi montado em placas do tipo deep well de 96 poços com capacidade de 2,2 ml, onde cada coluna contém soluções correspondentes às etapas do processo de extração, sendo elas: lise celular, ligação do material genético às beads magnéticas, lavagens e eluição. O extractor utilizado foi o Extracta 32 (Loccus) e diversas combinações de reagentes foram testados com base na literatura. Como critério de sucesso na extração foram avaliados a concentração, razões de pureza (260/280 e 260/230) e integridade do material genético por gel de agarose.

Resultados e Conclusão

O conjunto de reagentes formulado é eficaz em extrair ácidos nucleicos de polpa de açaí e o parasita, apresentando DNA íntegro com concentrações médias de 160ng/ul e razões de pureza 260/280 e 260/230 de 1,8 e 1,4, respectivamente. O protocolo no extrator foi padronizado em aproximadamente 45 minutos. Na reação de qPCR foi possível detectar de 1000 parasitas até 20 parasitas por ml de açaí contaminado artificialmente.

Palavras-chave

Extração automatizada, T cruzi, Açaí.