Dados do Trabalho

Título

PCR EM TEMPO REAL COM HIGT-RESOLUTION MELTING COMO ESTRATÉGIA PARA GENOTIPAGEM DE Giardia lamblia

Introdução

Giardia lamblia é um enteroparasito com distribuição global, de caráter zoonótico, transmissível por via hídrica ou contato direto intra e interespecífico. A propagação de infecções parasitárias está relacionada com condições de saneamento básico precárias, maior vulnerabilidade socioeconômico-cultural e de higiene.
A espécie G. lamblia encontra-se subdividida filogeneticamente em genótipos nomeados em ordem alfabética de A a H. A infecção em humanos é mais frequentemente associada aos genótipos A e B, no entanto, outros genótipos espécie-específicos de outros animais, especialmente o genótipo E, vêm sendo relatados em humanos. Isto suscita o questionamento se esses genótipos se adaptaram ao hospedeiro ou se sempre foram capazes de infectar humanos. Os estudos de genotipagem de G. lamblia no Brasil são relativamente recentes e entre os anos de 2007-2019 foram identificados apenas 35 estudos no Brasil. Tais dados apontam que o interesse em estudos de caracterização de G. lamblia tem crescido no país, entretanto o tema ainda é pouco explorado. Atualmente, o alto custo das estratégias de caracterização de genótipos de G. lamblia (como o sequenciamento gênico) faz com que pouco seja conhecido sobre a associação entre genótipos, virulência, patogênese e potencial de resistência a fármacos.

Objetivo (s)

Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi propor a PCR em tempo real com High Resolution Melting (PCR-HRM) para diferenciação de genótipos de G. lamblia encontrados em humanos.

Material e Métodos

Para isso foram desenhados primers específicos para amplificar um gene já utilizado no sequenciamento para genotipagem (Bgia). Foram sintetizadas sequências nucleotídicas (Gblocks) do gene Bgia dos genótipos A, B e E. O DNA sintético foi diluído e dosados no nanodrop. Uma diluição seriada do DNA foi submetida a amplificação por qPCR e posterior dissociação dos fragmentos por HRM.

Resultados e Conclusão

Após a padronização com o DNA sintético, foram testadas até o momento 15 amostras previamente genotipadas por sequenciamento gênico pelo método de SANGER, agrupadas no genótipo A (N=5), no genótipo B (N=5) e no genótipo E (N=5). Desta forma observamos 100% de concordância entre as duas técnicas utilizadas. Com isso podemos concluir que a PCR-HRM se mostrou promissora para discriminar os genótipos apartir de amostras clínicas e que a validação desta técnica poderia baratear e viabilizar a expansão dos estudos de genotipagem de G. lamblia.

Palavras-chave

Genótipos, Giardia lamblia, diferenciação, validação, PCR- High Resolution Melting