Dados do Trabalho

Título

ANTÍGENOS MULTIEPÍTOPOS, DESENHADOS A PARTIR DE EXOANTÍGENOS DE Leishmania infantum, COMO CANDIDATOS VACINAIS

Objetivo (s)

O objetivo deste trabalho é avaliar a imunogenicidade e eficácia vacinal de um antígeno multiepítopos contendo sequências dos principais exoantígenos secretados e excretados in vitro por Leishmania infantum (Exo-Ags).

Material e Métodos

Para identificação dos Exo-Ags imunorreativos, inicialmente os mesmos foram obtidos a partir de formas promastigotas do parasito e, em seguida, submetidos à eletroforese e Western-blotting bidimensionais, utilizando pools de amostras de soro coletadas de camundongos BALB/c, previamente imunizados com Exo-Ags, de pacientes com leishmaniose visceral e indivíduos hígidos. Os spots imunorreativos foram excisados e submetidos à análise por espectrometria de massas por ionização por electrospray. As proteínas identificadas foram submetidas à predição de epítopos de células TCD4+, TCD8+ e células B, e os epítopos selecionados utilizados na construção de antígenos multiepítopos, que estão sendo produzidos em bactérias Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS.

Resultados e Conclusão

Na eletroforese bidimensional, foram identificados 90 spots e, apesar do número elevado de proteínas que compõem os Exo-Ags, apenas nove spots foram identificados como imunorreativos para os pools de soro utilizados. A partir das análises de predição de epítopos, quatro proteínas multiepítopos, denominadas PQ-1, PQ-2, PQ-3 e PQ-4, foram construídas. Todas foram preditas como antigênicas, não alergênicas, não tóxicas e sem um grau significativo de identidade com proteínas humanas, caninas ou murinas. Até o momento, as proteínas PQ-1 e PQ-4 foram produzidas e purificadas com sucesso. Dando seguimento, PQ-2 e PQ-3 serão purificadas e cada uma será utilizada em um protocolo de imunização de camundongos BALB/c. Amostras de sangue serão coletadas antes de cada imunização e reforços, para avaliação da resposta imune celular e humoral. Após o último reforço, os camundongos serão desafiados com L. infantum e novas amostras de sangue serão obtidas para avaliação da resposta imune. Por fim, os camundongos serão eutanasiados para avaliação da carga parasitária no fígado e no baço pela técnica de diluição limitante e PCR quantitativa em tempo real. Dessa forma, esperamos desenvolver uma formulação vacinal altamente imunogênica, que seja capaz de desencadear uma resposta imune predominante do tipo T helper 1, com produção de citocinas como interferon-gama e interleucina 2 e produção de anticorpos da subclasse IgG2.

Palavras-chave

leishmaniose visceral; exoantígenos; multiepítopos; imunoproteômica; imunogenicidade

Agradecimentos

CAPES; FAPEMIG