Dados do Trabalho

Título

Tripanotiona redutase de Leishmania braziliensis como alvo molecular para prospecção de novos inibidores: Avaliação in vitro e in silico da Giroxina e Convulxina de Crotalus durissus terrificus com atividade antiparasitária

Introdução

A tripanotiona redutase (TR) é um alvo molecular validado para o desenvolvimento de novos inibidores para o tratamento de doenças causadas por Trypanosomatídeos. Noutra vertente, toxinas de veneno de serpentes, devido à diversidade estrutural e funcional, são fontes importantes de moléculas bioativas para o desenvolvimento de novas drogas, inclusive para o tratamento de doenças como a Leishmaniose.

Objetivo (s)

Nesse contexto, o presente trabalho tem como objetivos analisar a interação de toxinas (giroxina e convulxina de Crotalus durissus terrificus) com a tripanotiona redutase de L. braziliensis (TRLb) por modelos in silico e avaliar sua inibição por modelos in vitro.

Material e Métodos

O veneno bruto de C.d.t. foi obtido do banco de venenos do LABIOPROT-FIOCRUZ-RO, os quais possuem autorização nº 27131-1 do IBAMA, autorização nº 010627/2011-1 (CGEN) e registro projeto nº AF4B1DA (CGEN). Este foi fracionado por cromatografia de exclusão molecular e as frações liofilizadas e armazenadas à temperatura de - 20ºC. Os ensaios in vitro foram realizados com formas amastigotas e de Leishmania braziliensis usando 10 µL de convulxina e giroxina e anfotericina B como controle positivo, na concentração de 0,2µg/mL e como controle negativo o DMSO, avaliando a viabilidade por MTT. Numa abordagem in silico, foi realizado o docking molecular entre a TRLb e toxinas utlizando a ferramenta ClusPro2.0.

Resultados e Conclusão

Diante disso, a TRLb foi obtida com alto grau de pureza e com sua atividade catalítica preservada, apontando massa molecular e ponto isoelétrico compatíveis com os descristos na literatura. O fracionamento do veneno bruto de C.d.t resultou em 5 frações enriquecidas com as toxinas de interesse utilizando massa molecular como parâmetro. As toxinas convulxina e giroxina foram capazes de inibir o crescimento de L. amazonensis em 40% e 38% respectivamento. Os ensaios in silico indicaram que a convulxina é capaz de interagir com o sítio do NADPH e a giroxina no sítio catalítico da enzima, abrindo possibilades para o desenvolvimento de novas pesquisas na área.

Palavras-chave

Tripanotiona redutase. Leishmania braziliensis. Toxinas de serpente. Convulxina. Giroxina.

Agradecimentos

CNPq. FAPERO. CAPES