Dados do Trabalho

Título

EPIDEMIOLOGIA BASEADA EM ESGOTO: ANÁLISE E VALIDAÇÃO DE ESTRATÉGIAS PRÉ-ANALÍTICAS VISANDO O MONITORAMENTO GENÔMICO DE DIFERENTES PATÓGENOS DE IMPORTÂNCIA EPIDEMIOLÓGICA EM FORTALEZA, CEARÁ

Introdução

A epidemiologia baseada no esgoto tem sido uma importante ferramenta de vigilância em saúde coletiva de patógenos emergentes, por potencialmente permitir a avaliação de perfis epidemiológicos de grupos populacionais, a partir de uma única amostra de esgoto coletada. Os dados gerados podem levar a visualização de cenários realísticos e menos enviesado por subnotificações ou subtestagem laboratorial quando comparados à vigilância baseada na investigação de casos isolados. Podem ainda proporcionar uma avaliação mais imparcial e a predição de surtos locais e picos epidêmicos.

Objetivo (s)

Por se tratar de amostras complexas e com populações heterogêneas de microrganismos, o estudo visa aprimorar estratégias pré-analíticas, incluindo validação kits comerciais para processamento de amostras coletadas semanalmente de ETEs de Fortaleza, viabilizando a obtenção de material genético de alta pureza e concentração de patógenos, viáveis para vigilância genômica.

Material e Métodos

As amostras serão avaliadas quanto a necessidade de tratamento prévio, com uso de MgCl2 (2,5 M) e ácido acético (1 M), até pH entre 3 e 3,5, seguido de concentração viral por meio de filtração em membrana de éster de celulose (0,45 μM), estéril. Em seguida, serão comparativamente avaliados métodos com coluna de silica: i) kit dual (Qiagen), ii) PRT DNA&RNA (Zybio), iii) NucleoSpin Soil (Bioanalysis); e in-house iv) fenol-cloroformio-isoamil. A seleção metodológica ocorreu por estudos referendados e análises técnicas de diferentes grupos de pesquisa atuantes na área. A fragmentação da membrana se dará por homogenização de alta capacidade (FastPrep 5G MPBio) e a detecção e quantificação baseada em alvos virais circulantes, prováveis de serem detectados por PCR em tempo real (QuantStudio 7 PRO, Thermo Fisher Scientific). Painéis específicos serão customizados para os seguintes grupos: Sars-CoV-2, Poliovírus, Influenza, VSR, Arbovírus, Adenovírus e Monkeypox.

Resultados e Conclusão

As etapas analíticas para definição dos kits de extração e detecção dos patógenos, que estão em andamento, indicam clara necessidade de aprimoramentos técnicos. A partir da padronização do melhor fluxo pré-analítico, será possível determinar-se a estratégica analítica mais robusta que contribuirá para construção do Programa Nacional de Vigilância Baseada no Esgoto e na definição de ensaios mais competentes para detecção e sequenciamento de patógenos de maior importância em Saúde Pública.

Palavras-chave

Vigilância de esgotos; PCR em Tempo Real; Patógenos Emergentes, NGS

Agradecimentos

Fiocruz, CNPq, Funcap