Dados do Trabalho

Título

Modulação da Osteopontina e suas isoformas de splicing alternativo durante a infecção pelo SARS-CoV-2 in vitro

Introdução

A infecção pelo SARS-CoV-2 pode se apresentar desde a forma assintomática até a doença clinicamente grave com evolução à óbito. Esse vírus vem evoluindo de tal forma que variantes de preocupação vêm sendo descritas desde 2020. Entretanto, além de fatores associados ao patógeno, a resposta imune do hospedeiro, quando exacerbada contribui para o desfecho clínico desfavorável, com o envolvimento de marcadores inflamatórios. Neste contexto, a osteopontina (OPN), glicoproteína envolvida em processos fisiopatológicos, como inflamação e oncogênese, apresenta-se elevada no soro de pacientes com COVID-19, correlacionando-se com a doença grave. A OPN poderia atuar como quimiocina, atraindo e ativando monócitos, induzindo secreção de citocinas e promovendo lesão tecidual. A OPN sofre splicing alternativo, gerando isoformas distintas (A, B, C, 4 e 5), mas ainda não há descrição da modulação das isoformas de splicing alternativo da OPN (OPN-SI) na COVID-19.

Objetivo (s)

Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a modulação da OPN e das OPN-SI na infecção por SARS-CoV-2.

Material e Métodos

Para tanto, utilizamos células Calu-3, que são células epiteliais, e THP-1, que são monócitos. As células foram infectadas com isolados das variantes do vírus original, Gama e Delta, em MOI de 0,1, por até 24 horas. Foi avaliada a expressão das OPN-SI e citocinas inflamatórias, por PCR quantitativo em tempo real e a OPN secretada (sOPNs) foi mensurada por ELISA.

Resultados e Conclusão

Assim, observamos que, na linhagem Calu-3, a infecção com a variante gama reduziu a expressão da OPN4 em 6 horas pós infecção (hpi), porém nenhuma modulação diferencial foi observada nas outras OPN-SI na infecção com as variantes adicionais. Entretanto, a sOPN estava aumentada na infecção com as variantes gama e delta em 24hpi. Na célula THP-1, houve aumento na expressão da OPNt, OPNc e OPN4 na infecção com a variante delta, enquanto a infecção pela variante gama aumentou OPN4 e reduziu OPNc no tempo de 3 hpi. A sOPN não foi modulada na célula THP-1 infectada com as variantes. Não foi observada modulação da OPNt quando as células THP1 foram infectadas com o vírus original. Entretanto, ao tratar essas células com a OPN recombinante humana, o nível de expressão da OPNt aumento de forma significativa. Esses dados mostraram modulação diferencial das OPN-SI na infeção pelo SARS-CoV-2, de forma variante, tempo e linhagem específicos. Ensaios subsequentes avaliarão as vias de sinalização envolvidas com a função da OPN na infecção.

Palavras-chave

OPN, Isoforma

Agradecimentos

PGBCM, Capes, CNPq