Dados do Trabalho

Título

Desenvolvimento e validação de ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando antígenos recombinantes, para o diagnóstico da leishmaniose mucosa

Introdução

A leishmaniose mucosa (LM) é considerada a forma mais grave de leishmaniose tegumentar (LT), devido ao seu caráter destrutivo e potencial para gerar dano funcional nos tratos respiratório e digestivo. Devido a limitação das estratégias diagnósticas, no Brasil cerca de 26% dos pacientes com LM são tratados sem confirmação laboratorial.

Objetivo (s)

A fim de ampliar as estratégias disponíveis, este estudo baseia-se no desenvolvimento e validação de um ensaio de imunoenzimático (ELISA), utilizando antígenos recombinantes, para o diagnóstico da LM.

Material e Métodos

A partir de revisão sistemática da literatura, foram selecionados três antígenos potenciais para o diagnóstico sorológico da LM: Tryparedoxina Peroxidase mitocondrial (mTXNPx), Proteína Quinase Ativada por Mitógeno 4 (MAPK4) e Proteína de Membrana dos Kinetoplastídeos 11 (KMP-11) de Leishmania spp. As sequências de nucleotídeos, que codificam para os antígenos selecionados, foram sintetizadas e inseridas no plasmídeo pET28a e, então, foram produzidos os antígenos recombinantes. A padronização do ELISA utilizando cada antígeno recombinante foi realizada através da alteração de parâmetros relevantes, como o tipo de microplaca de ELISA, concentração do antígeno, diluição das amostras e diluição do conjugado. Para a validação, foi realizado estudo cego com amostras de painel de soro de pacientes atendidos no Centro de Referência em Leishmaniose (CRL) do Instituto René Rachou (IRR/Fiocruz), com suspeita de LM e acometimento mucoso. No grupo caso, foram incluídas amostras de 50 pacientes com diagnóstico de LM confirmados por PCR dirigida ao kDNA. No grupo não caso, foram incluídas amostras de soros de 15 pacientes com doença em mucosa e confirmação diagnóstica para outra condição, como paracoccidioidomicose, esporotricose e rinite. Em paralelo, foram incluídos também amostras de soro de 58 pacientes com marcadores para outras condições infecciosas como hepatites, dengue, zika vírus e sífilis.

Resultados e Conclusão

O ELISA com mTXNPx apresentou sensibilidade e especificidade de 87% e 46%, respectivamente. Já o ELISA, usando KMP11, apresentou sensibilidade de 50% e especificidade de 77%.No ELISA utilizando MAPK4, foram obtidas sensibilidade e especificidade de 50% e 67,12%, respectivamente. Os resultados demonstram a aplicabilidade do ensaio de ELISA para o diagnóstico da LM no Brasil.

Palavras-chave

Leishmaniose Mucosa; diagnóstico laboratorial; ELISA

Agradecimentos

CNPq e FAPEMIG