Dados do Trabalho

Título

É possível empregar a técnica de PCR digital para detecção molecular do vírus da hepatite B?

Introdução

Métodos moleculares precisos para detectar e quantificar o DNA do vírus da hepatite B (HBV) são essenciais para o diagnóstico, orientação de decisões de tratamento, avaliação da resposta ao tratamento e determinação do risco de complicações relacionadas ao HBV. A PCR digital baseado em gotas, do inglês Droplet-based Digital PCR (ddPCR), é uma tecnologia mais sensível que tem sido amplamente utilizada para quantificação absoluta de vírus como SARS-CoV-2, citomegalovírus, influenza e HIV em amostras clínicas. Poucos estudos avaliaram o uso de ddPCR para quantificação de HBV em amostras clínicas e a necessidade de padronização de novos protocolos de diagnóstico é evidente.

Objetivo (s)

O objetivo do estudo é avaliar a técnica de ddPCR para o diagnóstico do HBV, comparando com o padrão-ouro qPCR.

Material e Métodos

Foram selecionadas 43 amostras de soro provenientes do biorrepositório do Laboratório de Hepatites Virais, onde 35 eram provenientes de casos de hepatite B (HBV DNA reagente) e 8 indivíduos controle negativo. O DNA foi extraído usando kit comercial (QIAamp DNA Mini Kit - QIAGEN) e posteriormente submetido a reações de ddPCR (QX200 Droplet Digital PCR – Biorad) e qPCR (Abbott RealTime HBV), ambas com a metodologia Taqman. Foram realizados cálculos de sensibilidade, especificidade e acurácia da técnica de ddPCR.

Resultados e Conclusão

Um total de 23 mulheres e 20 homens, entre 20 e 72 anos de idade foram incluídos. A média de carga viral pelo qPCR foi igual a 5,4 x 107 cópias/mL e pelo ddPCR foi 3,3 x 107 cópias/mL. O ddPCR Taqman apresentou sensibilidade, especificidade e acurácia de 100%, 91%, 74%. A metodologia de ddPCR com sonda Taqman apresentou bons resultados quando comparado a técnica de PCR em tempo real demonstrando que pode ser uma alternativa para o diagnóstico molecular principalmente em amostras com baixa carga viral.

Palavras-chave

hepatite B, diagnóstico, PCR digital

Agradecimentos

Financiamento: CNPq, FAPERJ.