Dados do Trabalho

Título

Avaliação da inibição da enzima di-hidroneopterina aldolase (EC 4.1.2.25) de Mycobacterium tuberculosis por novos candidatos a fármacos antituberculose

Objetivo (s)

Avaliar o potencial inibitório dos análogos estruturais da 8-mercaptoguanina sobre a enzima di-hidroneopterina aldolase (EC 4.1.2.25) de Mycobacterium tuberculosis.

Material e Métodos

A obtenção dos análogos da 8-mercaptoguanina (8-MG) foi realizada por síntese química utilizando bromoacetamidas em meio básico. Os compostos sintetizados foram avaliados quanto ao seu potencial inibitório frente à enzima di-hidroneopterina aldolase de Mycobacterium tuberculosis (MtDHNA) utilizando um método contínuo de atividade enzimática por espectrofluorimetria, monitorando por 6 minutos a conversão de 7,8-di-hidroneopterina (DHNP) a 6-hidroximetil-7,8-di-hidropterina (HP) catalisada pela MtDHNA. Os comprimentos de onda utilizados são 365 nm e 525 nm para excitação e emissão, respectivamente. A determinação dos valores de IC50 e a análise de inibição tempo-dependente nos tempos de 0, 5, 10, 20 e 40 minutos de pré-incubação da enzima com os compostos foram realizadas para todos os análogos estruturais obtidos. Além disso, os perfis de inibição de 6 compostos foram determinados por meio de ensaios de determinação da constante inibitória (Ki). A concentração inibitória mínima das moléculas foi determinada frente à cepa laboratorial H37Rv de M. tuberculosis por meio do ensaio colorimétrico de redução da resazurina em microplaca.

Resultados e Conclusão

Foram obtidos 16 análogos estruturais da 8-MG por meio de síntese química. Todos os compostos foram capazes de inibir a atividade enzimática da MtDHNA, com valores de IC50 variando de 0,33 a 17,35 µM. O efeito inibitório dos compostos não foi dependente do tempo até os 40 minutos de pré-incubação com a MtDHNA, sugerindo que a ligação e a dissociação desses compostos com a enzima não ocorrem lentamente. 4 compostos apresentaram perfil de inibição competitivo com o substrato DHNP, sugerindo que esses compostos se ligam apenas à enzima livre e 2 compostos apresentaram perfil de inibição não-competitivo com DHNP, indicando que se ligam tanto à enzima livre quanto ao complexo enzima-substrato. As constantes de inibição do complexo enzima-inibidor variaram de 0,24 a 1,91 µM e as constantes de inibição do complexo enzima-substrato-inibidor variaram de 1,52 a 6,26 µM. Apenas um composto apresentou atividade inibitória frente ao bacilo M. tuberculosis com a concentração de 40 µg/mL.

Palavras-chave

Tuberculose, di-hidroneopterina aldolase, inibição enzimática.

Agradecimentos

CAPES, FAPERGS, CNPq, BNDES.